بسم الله الرحمن الرحيم رح يكون موضوعنا اليوم إن
شاء الله الـ Hemoglobin F في السين أو يسمى بالـ
Acid Elution Test هذا الفحص الغرض منه إنه نطلع على
الـ distribution of Hemoglobin F in the red cells
يعني شوف كيف Hemoglobin F موزع بين الخلايا وهذا
بيساعدني في تشخيص الـ hereditary persistence of
Hemoglobin Fإذا كنتوا فاكرين قلنا الـ Hereditary
Persistence of Hemoglobin F هذه حالة مرضية بيظل
الـ Hemoglobin F يتصنع فيها طول الحياة طيب
Hemoglobin F مرتفع طب شو بده يعرفني يعني إيش سببه؟
هل هو جاي من ثلاثينية؟ هل هو في خلل في نوع تاني من
الـ Hemoglobin أدى للارتفاع هذا؟ فبالتالي هذه
الحالة أو هذا الفحص بيساعد في تشخيص الـ Hereditary
Persistence of Hemoglobin F شغلة تانية في حالة ما
أنا أكون شاكة يعني مثلًا الست الحامل تكون في عندها
مشكلة مثلًا الحالات اللي بيسموها انفصال في المشيمة
انفصال جزئي في المشيمة هنا بيكون فيه خوف أنه صار
اختلاط بين دم الأم والطفل طبعًا هو في الوضع
الطبيعي مافيش مشكلة إلا إذا كانت الأم فصيلة سالب
والطفل فصيل موجب هيك هتنتقل خلايا من الطفل إلى
أمه ويصير عند الأم immunization يعني هتتوّلد
antibodies لخلايا الطفل هذا وممكن تقتله أنتو
عارفين قصة الـ RH والفصيلة الدم قلتلكم أنه عند
الولادة ممكن تنتقل خلايا الدم واحنا بنعطي إبرة الـ
Anti-D بتنحل المشكلة لكن لو خلال الحمل صار انتقال
لبعض الخلايا وهذا الطفل صدفت فصيلته كانت موجبة
والأم سالبة هنا ممكن الأم تكون أساة مضادة تنتقل
لجنين الحمل وتقضي عليه أو تتعمل عنده مضاعفات
وتكسير في الدم فبالتالي إذا أنا كنت شاك أنه صار
اختلاط بين دم الأم والطفل ممكن أخد عينة من الأم أو
أشوف هل في عند الأم خلايا من خلايا الطفل طبعًا
خلايا الطفل هتبين أنه في عندي خلايا موزعة خلال الـ
Blood Film فيها كمية كبيرة من Hemoglobin F تمام؟
إذاً in determining the presence of fetal red
cells in the maternal circulation during pregnancy
المشكلة أنه خلال الحمل مش لازم تصير الشغل هذه إيش
بالزمن الـ reagent؟ بالزمن fixative solution اللي
هو 80% إيثانول بالزمن fetal cell buffer عبارة عن
acidic buffer هنفهم لإيش بعدين بلزمني صبغة هيلزمني
إريثروسين بيه وإيرليخستان اللي هي متوكزيلين
هلزمني كوبلينجار للصباغة و هلزمني إيش water bath
العين
اللي بستخدمها هي Venus blood مجموعة في Edita ممكن
ناخده من fingertip من الأصبع أو من skin puncture
يعني for the best result الدم لازم يعني ينشغل خلال
6 ساعات الأولى من جمع العينة لكن لو احنا حطينا
العينة في التلاجة ممكن أخد نتائج تظل تعطيني نتائج
كويسة لمدة أسبوعين الآن بعمل سمير باخد عينة البلط
بعمل وينها سمير عادية و بعمللها fixation خلال
ساعتين من تحضيرها تمام عشان ما تتغيرش الـ
morphology تحت الخلايا ويتأثر Hemoglobin F بداخل
الخلايا إذا حضرت سمير عملتلها fixation الخطوة اللي
بعد هيك بتبين في الـ principle blood smear هذه
اللي عملتلها fixation بعمللها incubation مع citric
acid buffer Citric Acid Buffer الـ pH تبعته حامضية
3.2 إلى 3.3 عند هذه الـ pH هتلاقي أن أنواع
الهيموجلوبين الأخرى other than hemoglobin F
هيصيرلها إليوشن من الخلية إليوشن هتنحل وتخرج من
الـ Red Blood Cell بينما Hemoglobin F هيظل في داخل
الخلية إذن Hemoglobin F عند هذه الـ pH مقاومة لـ
elution من خلية الدم الأحمر بينما أنواع أخرى تم
إزالة من خلية الدم الأحمر الأنواع الأخرى من الـ
Hemoglobin هتطلع من الخلية تمام؟ الـ slides are
stained with hematoxilin طبعا بعد الخطوة هذه تمام؟
أنا طلعت أنواع الـ Hemoglobin الأخرى من الخلايا
تظل عندي بس من Hemoglobin F فلكن أصبغ الخلايا عشان
أشوفهابصبغها بصبغتين الصبغة الأولى اللي هي
hematoxilin عشان تصبغ عند ال white blood cells
نيوكلياي والاريثروسين عشان تصبغ ال RBCs تمام بعد
هيك بشوف الشريحة تحت تحت المايكروسكوب وبطلع قشة
خلايا مصبوغة هي اللي هتكون فيها Hemoglobin F
الخلايا المش مصبوغة هيكون مافيش فيها أصلا كان
Hemoglobin F تمام؟وبحسب نسبة الخلايا اللى موجود
فيها hemoglobin F زى إذا كنتوا فاكرين ما حسبنا
نسبة ال reticulocyte يعني بعد كل ال RBCs وبعد
الخلايا اللى فيها hemoglobin F وبحسب النسبة
المئوية لإلها هاد الطريقة بالتفصيل هاد الطريقة
احنا مش راح نشتغلها يعني بس بنذكرها ذكر تمام ماشي
اش احنا اللى بنشوفه الصورة اللي على الشمال الصورة
اللي على الشمال في عندي عدد كبير من الخلايا فيها
Hemoglobin F ملاحظين كيف المصبوغة بينما الخلايا
الفاضية هذه مافيش فيها Hemoglobin F فبالتالي أنواع
ال Hemoglobin اللي فيها طلعت وخلاص يعني ماضلش فيها
حاجة تنسبغ نيجي إلى هنا هذه يعني blood film عادي
لشخص normal كل الخلايا اللي عنده مش مصبوغة بعد خلية
واحدة قد تكون reticulocyte لأن الـ reticulocyte مش
هيطلع الـ Hemoglobin اللي فيها، تمام؟ هنحكي هذا
الكلام، إذا هذا فيلم فيه عدد من خلايا فيها
Hemoglobin F بينما هنا لأ، هيكون فيلم Normal،
مافيش عنده نسبة عالية من Hemoglobin F بحسب نسبة
الـ RBCs اللي بتحتوي طبعاً بنعدد زي ما قلتلكم بحسب
ال number of RBCs اللي فيها Hemoglobin F وبجيب
النسبة المئوية بجيب ال number في ال fieldات اللي
عديتها على ال total number لل RBCs وبضرب في 100%
فبطلع عندي نسبة ال RBCs اللي فيها Hemoglobin F
طيب،
هنا عندي بعض النقاط بدنا نشوفها أول حاجة ال
reticulocyte may resist elution and would therefore
give the appearance of cell containing hemoglobin
F توي شفناها قولتلكم هذه الخلية ممكن تكون
reticulocyte reticulocyte لأن ال cell membrane
بتاعها قوي و لسه قلية جديدة و young فبالتالي مش
هتسمع لأي نوع من ال hemoglobin غالبا أنه يطلع منها
تمام الشغل التاني the degree of elution of adult
hemoglobin may vary from patient to patient يعني
حتى ال hemoglobin بيختلف درجة ال elution من شخص
إلى شخص حسب الـ Cell Membrane وحسب طبيعة الخلايا
تمام؟ الآن الـ Ethyl Alcohol احنا متعودين نستخدم
كحول Absolute Alcohol للـ Fixation لكن هنا بنستخدم
80% لو استخدمت كحول أعلى من 80% ممكن يؤدي لخروج
Hemoglobin F كمان من الخلايا تمام؟ لو استخدمت كحول
أقل من 80% ممكن يغير الـ Morphology للخلايا يعمل
Morphologic Alteration للخلايا وبالتالي هتتلف
الخلايا عندي ومش هقدر أشوفها إذن التركيز اللي
بستخدمه فقط 80% طيب،
نشوف إيش الفرق في حالة الـ Hereditary Persistence
of Hemoglobin F وفي حالات الثلاثيمية وتوزيع
Hemoglobin F كيف بيكون في الخلايا في الـ
Hereditary Persistence هتلاقي إن Hemoglobin F طبعاً
بدي أذكركم بس إيش هو الـ Hereditary Persistence
قلتلكم Hemoglobin F بظل طول الحياة يتصنع بنسبة
معينة طب كيف بدي أفرقه عن الناس اللي عندها خلل في
الـ Hemoglobin مثلًا ونتيجة خلل في نوع معين من الـ
Hemoglobin أو في الـ Chain بتاعة الـ Hemoglobin
هيعلق أنواع تانية من الـ Hemoglobin زي مثلًا حالة
الـ Thalassemia حالة الـ Sickle cell anemia الـ
Acquired Oblastic Anemia الحالتها دي كلها و
الحالات اللي لها علاقة بالـ Hemoglobin و Batters
اللي ممكن يرتفع فيها Hemoglobin F كيف بدي أفرقهم؟
هي Hereditary Persistence أو فيتا الهموجلوبين طبعًا
Hereditary Persistence أو فيتا الهموجلوبين هتلاقي
أنه Hemoglobin F مثلًا عند الشخص هذا نسبة
Hemoglobin F قوله 20% هتلاقي الـ 20% موزعين في كل
الخلايا بالتساوي يعني كل خلية هيكون فيها مصبوغة
جزئيًا ليش؟ لأنه فيها نسبة من Hemoglobin F زيها زي
الخلية اللي جنبها زي اللي جنبها زي اللي جنبها يعني
كل الخلايا فيه تجانس في كمية Hemoglobin F بداخلها
بينما الحالات المرضية الأخرى هتلاقي في عندك خلايا
بذاتها هي اللي فيها Hemoglobin F والخلايا التانية
مافيش فيها Hemoglobin F فبالتالي، إيش الفرق بين
الفلمان؟ في الـ Hereditary Persistence هتلاقي فيه
عندك صباغة بلون فاتح لكل الخلايا إيش إنه فيها نسبة
كلها من Hemoglobin F بينما في حالات المرضية الأخرى
هتلاقي عندك بعض الخلايا لازالت مختفظة بـ
Hemoglobin F ومسبوغ فيها سباقه قوية بينما خلايا
تانية مافيش فيها Hemoglobin F ومش مسبوغة بسباقه
قوية تقريبًا زي الفيلم اللي شوفناه وإنه في كمية
كبيرة من الخلايا مسبوغة وخلايا مش مسبوغة هذا ممكن
يكون لحالة ثلاثيميا أو حالة شكل سلقانية تمام؟ أو
Hemoglobin B بغض النظر إيش نوعها طيب، في عندنا نقطة
بهمة كتير اللي هي الـ pH إحنا أعطينا Range معين
للـ pH ما يقلش عن 3.1 وما يزيدش عن 3.3 لو ..
لو قل الـ pH هذا راح يخلي Hemoglobin F يطلع من
الخلايا طب لو زاد عن 3.3 هيمنع أنواع الـ
Hemoglobin أخرى أنها تطلع من الخلايا يعني لا ينزل
عن 3.1 ولا يزيد عن 3.3، تمام؟ شغلة تانية درجة
الحرارة لو زادت عن 25 درجة خلال الـ Fixation ممكن
تمنع الـ Elution للـ Normal Hemoglobin صحيح هذه
الطريقة حساسة تغيرات فيها كتير أو الـ Reaction
بتاعها تحضيرها كتير بيغلب وما بتستخدمش على نطاق
واسع فإحنا بس يعني بنذكرها دكتور إحنا بحكي بس الـ
Principle وفايدتها أما يعني حتى لما شغلناها كانت
مرة تظبط ومرة ما تظبطش لأن الـ Reagent بتاعتها
ممكن يكون تحضيرها فيه مشكلة يعني مافيش إلها
Reagent جاهزة بتيجي ونشتغل عليه لأ الـ Reagent
بتاعها بتحضر وبياخد وقت في التحضير ومش دايما بيعطي
نتائج كويسة فإحنا بس بنكتفي بذكر الـ Principle
تاعتها وفائدتها والأخطاء اللي ممكن نقع فيها هذه
الطريقة موجودة يوم ما تفكروا تشتغلوها هي موجودة
معاكم يعطيكم العافية