السلام عليكم ورحمة الله وبركاته، يعطيكم العافية
جميعًا إن شاء الله، محاضرتنا اليوم بعنوان «جلوكوز
تستأنف... نبدأ بـ Introduction بسيطة. جلوكوز is a
monosaccharide found in fruits and also derived
from the breakdown of carbohydrates in the diet
and the conversion of glycogen by the liver. بحكي لي إن
الجلوكوز هو عبارة عن سكر أحادي موجود في fruits،
في الفواكه، يعني لو احنا تناولنا fruits، معنى
الكلام إحنا بنأكل أو بنتناول الجلوكوز. المصدر
الأساسي للجلوكوز هو الـ diet، هو الأكل، وبالأخص إذا
أكلنا carbohydrates. إذا المصدر الأساسي لسكر
الجلوكوز هو أن نَتناول أكلات، وبالأخص الـ
carbohydrates. أيضًا، في مصدر آخر للجلوكوز، أنه لما
الإنسان يأكل أكلات، جسمه مليء بالسكر، طبعًا، هذه الزيادة
في السكر في الدم ستزيد، فماذا يحدث للجسم؟ يصبح الجسم
وبالأخص الكبد (liver)، يخزن السكر الفائض، تمام؟ يخزنه
على شكل جليكوجين. إذا الجلوكوز هو سكر أحادي، بشكل
أساسي، له مصدرين: المصدر الأول والأهم أنه نَحصل عليه
من الـ diet، من الأكل، وبالأخص الكربوهيدرات. المصدر
الثاني، أنه بعد ما أكلنا، الفائض من السكر في الجسم
يُخزّن على شكل جليكوجين داخل الـ liver لوقت
الحاجة، تمام؟ نقطة ثانية: جلوكوز is the body's main
source for cellular energy and brain function. يُعتبر السكر
هو المصدر الأساسي للطاقة في الجسم، يعني خلايا الجسم
عشان تشتغل، بدها طاقة، بدها energy، تمام؟ وهذه
الطاقة من أين تحصل عليها الخلايا؟ من تناولنا
للجلوكوز، للسكر، ومن ضمن هذه الخلايا، خلايا الدماغ
وجميع خلايا الجسم بحاجة إلى طاقة، هذه الطاقة مصدرها
تناول السكر. Glucose level in the body is regulated by
insulin, because insulin lowers the glucose level, and
glucagon, adrenaline, and cortisol cause elevation of
the glucose level. بيحكي لي هنا: مستوى السكر عند
الإنسان السليم، يفترض دائمًا في حالة balance، في حالة
توازن، تمام؟ ولازم مستوى السكر في الجسم، بميكانيزم معين،
يحافظ عليه، تمام؟ نحن جميعًا نعرف أن السكر، لو
أردنا أن نجري فحص السكر، النسبة الطبيعية التي يجب
أن تكون ما بين 70 إلى 110 milligram per deciliter. ممنوع
أن يزيد أو يقل. طيب، لو مستوى السكر زاد عن 110، يعني أنتَ
أكلتَ carbohydrates كثيرة، ماذا سيفعل جسمك؟ كردة فعل
طبيعية، يتم إفراز هرمون الإنسولين. هرمون الإنسولين
يُخفض مستوى السكر في الدم. إذا هرمون الإنسولين يتم
إفرازه إذا زاد مستوى السكر في الدم عن الوضع
الطبيعي، يأتي الإنسولين ويأخذ هذا السكر الموجود في
الدم، ويبدأ يدخله داخل الخلايا، وتخزن هذه السكريات في
الخلايا. الخلايا، يا إما تخزن، أو الخلايا تستخدمه
في عملياتها الحيوية. لكن على سبيل المثال، والعكس، أنه
لو لسبب ما حدث عندنا انخفاض في مستوى السكر، انخفض
أقل من 70، لربما هذا الشخص لا يأكل سكريات، لا
يأكل carbohydrates، انخفض عنده، ماذا يحدث؟
نتيجة انخفاض السكر، الجسم يقوم بإفراز هرمونات
الـ glucagon، والـ adrenaline، والـ cortisol. هذه الثلاثة
هرمونات تُساهم في ارتفاع مستوى السكر في الدم. تحسس
بانخفاض، ماذا يحدث؟ ترفع مستوى السكر في
الدم، طبعًا بميكانيزمات معينة، ستأخذونها عندما تأخذون
دورة الهرمونات. The various disorders in
carbohydrate metabolism may be grouped into
several categories, dependent primarily on
laboratory findings. بيحكي لي هنا أن الـ
carbohydrate metabolism، العمليات الخاصة بالسكر،
وتنظيم السكر، ممكن يحدث فيها disorder، يحدث فيها
مشاكل. عندي مشكلتان أساسيتان، شغلة اسمها
hyperglycemia، وشغلة اسمها hypoglycemia.
الـ hyperglycemia هي عبارة عن حالة مرضية، وتعريفها:
ارتفاع مستوى السكر في الدم، نسميه hyperglycemia.
الـ hyperglycemia هي عبارة عن حالة مرضية، وتعريفها:
ارتفاع مستوى السكر في الدم، نسميه hyperglycemia.
الـ hyperglycemia هي عبارة عن حالة مرضية، وتعريفها:
ارتفاع مستوى السكر في الدم، نسميه hyperglycemia.
الـ hyperglycemia هي عبارة عن حالة مرضية، وتعريفها:
hyperglycemia. لكن عكسها، الـ hypoglycemia
هي انخفاض مستوى السكر في الدم. Thus, associated with
a decreased plasma glucose concentration. والحالتان
حالات مرضية. The most frequently encountered
disorder of carbohydrate metabolism is a high
blood glucose due to diabetes mellitus. بقول لي إن
الـ most frequent، الأكثر شيوعًا بين الناس، هي حالات
الـ hyperglycemia، هي حالات ارتفاع مستوى السكر في
الدم، التي هي مرض السكري، الـ diabetes mellitus. أكثر
من الـ hypoglycemia. الـ hypoglycemia موجودة، بس مش
كثيرة. Estimates of the glucose concentration in
blood are required to... يعني ما هو الهدف من أن الدكتور
يطلب فحص السكر لأي شخص؟ يعني لماذا يطلب فحص السكر؟
لثلاثة أسباب أساسية. أول شغلة: help in the diagnosis of
diabetes mellitus. والله، فحص السكر يساعدني في تشخيص: هل
هذا الشخص الذي أمامي لديه diabetes mellitus؟ لديه
مرض سكري، أم إنسان طبيعي، لا يعاني من السكر، صحيح أم لا؟
إذا كنا نشتبه في إصابة شخص ما بالسكري، ماذا نقول له؟ اذهب واجعل
فحص سكر، صحيح أم لا؟ الهدف الثاني: Management of
diabetes mellitus patients. متابعة مرضى السكري، طبعًا
مرض السكري شائع ومنتشر بيننا. فأنا، مرضى السكري، تقريبًا
كل شهرين، كل ثلاثة شهور، تسمعون بهم يذهبون إلى العيادة
ويجري فحص السكر، ويجري فحص مخزون السكر، لكي
نتابع وضعهم، ونتابع حالتهم. أيضًا نجري الفحص لسبب
ثالث: "and monitoring of treatment in diabetes
mellitus patients". نريد متابعة جرعة، آسف، نريد
متابعة جرعة الإنسولين التي يأخذها مرضى السكري.
نعرف أنه في المراحل المتأخرة من مرض السكري، يصبح
الشخص يأخذ إبر إنسولين. طيب، كيف نريد أن نعرف أن جرعة
الإنسولين مضبوطة أم لا؟ وهل هذه الجرعة جيدة أم لا؟
فنطلب، لكي نتابع جرعة الإنسولين، نطلب من المريض
الذي يعاني من السكري أن يُجري فحص السكر. لثلاثة أهداف: في
التشخيص (diagnosis)، وفي متابعة المريض، ومتابعة
أيضًا جرعة الإنسولين التي يأخذها، أو التي يأخذونها
مرضى السكري. Methods of Analysis: طرق التحليل الخاصة
بفحص السكر. هنا سنستعرض كيّتات السكر، و
والتفاعل (reaction) الخاص بالسكر. يعني، ما هي الطريقة التي تعمل
بها الكيت؟ أول شغلة، in the past, the majority of
the quantitative tests for glucose determination
were dependent upon the oxidation of glucose by hot
alkaline copper solutions, or solutions of
potassium ferric cyanide. بحكي لي: زمان، قديماً، كان
مبدأ الكيت، ومبدأ الرياجينت الخاص بالسكر، أنه
عندما أضع الرياجينت على السيروم الخاص بالمريض،
الرياجينت يقوم بعمل oxidation، بأكسدة السكر
الجلوكوز الموجود في سيروم المريض. وعملية
الأكسدة هذه تتطلب حرارة (heat)، وتتطلب أيضًا وجود
alkaline media. يعني الـ reagent، الـ pH الخاص به يجب
أن يكون قاعديًا. إذن بشكل عام، بيحكي لي: قديماً كان مبدأ
الفحص يعتمد على أن الرياجينت الخاص بالسكر، في المواد
إذا أُضيف إلى السيروم الخاص بالمريض، سيؤكسد السكر
الجلوكوز الموجود في السيروم. وعشان يصير فيه أكسدة،
يجب أن يكون الرياجينت الموجود في الكيت له
alkaline pH. وهذا يتطلب أيضًا، من المتطلبات، درجات
حرارة عالية. الـ alkaline pH نوفره إذا كان موجودًا
داخل الرياجينت، الـ copper solution، أو محلول آخر
اسمه potassium ferric cyanide. هذه كلها مواد
كيميائية خاصة بالرياجينت، الـ alkaline pH،
القاعدي. هذه تم تغييرها، بمحاولة استخدام الـ orthotolidine
test، وبعدها بمحاولة استخدام الإنزيمات. بعد ذلك، هذه الطريقة
القديمة، وهذا الرياجينت، توقفت الشركات عن تصنيعه. فثاروا
ماذا؟ ثاروا واستخدموا طريقة أخرى، اسمها الـ
ortho-tolidine test. نريد أن نفهم أن التفاعل الخاص
بالسكر كان يحتوي على مادة اسمها ortho-tolidine، عندما كنتُ
أضيفها على السيروم، تأتي على الجلوكوز، وترتبط به
الجلوكوز، وتعطي مادة ملونة، ونحن نقيس هذا اللون،
وهو الذي كان يعبر عن مستوى السكر. طيب، هذه الطريقة
الثانية، الـ ortho-tolidine test، لماذا توقفت الشركات عن
استخدامها؟ لأن مادة ortho-tolidine هذه الموجودة
في التفاعل الخاص بالسكر مادة dangerous، وتسبب
السرطان (cancer). لأنها من مشتقات البنزين. تخيل،
أنتَ تجري فحص سكر، فحص روتيني، ورياجينت السكر، أنتَ تريد
أن يكون هناك دائمًا احتكاك به بيدك، وقد لا تكونين ترتدين
قُفازات (gloves)، فممكن أن يُسبب سرطان الجلد (skin cancer). لذلك
جاءت هذه الطريقة غير آمنة. فلنستبدلها
بالطريقة الثالثة، التي هي طريقة الـ enzyme method.
يعني، الرياجينت يكون فيه enzyme. هذا الـ enzyme
يتفاعل مع السكر الموجود في السيروم الخاص بالـ
patient. عندما نضعهما معًا، يعطيني لونًا،
وأنا أقيس هذا اللون عبر جهاز spectrophotometer.
جاءت طريقة الإنزيمات أفضل. أولاً: specific، متخصصة،
أحصل على إنزيم يتخصص، يرتبط فقط بالسكر، طبعًا. وطريقة
سريعة (quick)، بسرعة (quickly). و specificity، السرعة
والتخصصية عالية عند الإنزيمات، ولا تستهلك وقتًا
الفحص. وأيضًا، الإنزيمات، والمواد الموجودة في
الرياجينت، ليست dangerous، ليست خطرة، مثل الـ
ortho-tolidine. إذا الـ enzymatic methods give the
true glucose determination. تعطيني نسبة الجلوكوز
بشكل صحيح، because of the high specificity
للإنزيمات المتخصصة، of an enzyme for a particular
substrate, and doesn't consume time. والإنزيم
شئ سريع. other methods: طرق أخرى، تحتوي على مواد
خطرة (dangerous) على الجسم، مثل، على سبيل المثال، الـ ortho-tolidine.
مثل، على سبيل المثال، الـ ortho-tolidine.
هنا ملخص لكم طرق التحليل (Methods of Analysis)، طرق
التحليل الخاصة بكيّت السكر، بالرياجينت الخاص بالسكر، طبعًا.
أول شغلة، أول طريقة، هذه طريقة قديمة جدًا، توقفت
الشركات عن تصنيعها، تمامًا. توقفت الشركات عن تصنيع الكيت
الذي يعمل بهذه الطريقة، التي هي طريقة الـ
oxidation، الأكسدة، أو الـ reduction method، في الشريحة
السابقة، تحدثنا عن الأكسدة، لكن هنا كاتب الـ
reduction methods، طرق الاختزال. يعني، يكون فيه مواد
في الت
وفي وجود أنزيم آخر اسمه جلوكوز-6-فوسفات
Dehydrogenase، أعطوني مادة اسمها 6-gluconolactone
NADH + H+، هنا بتم قياس الـ NADH هذا
المركب، كلنا عارفين هذا المركب، بتم قياسه على
wavelength معروف و ثابت على طول موجي ثابت هو 340
نانومتر، كلنا عارفين أن الـ 340 هذا الـ
wavelength يقع في المنطقة فوق البنفسجية، الـ UV، الـ
Ultraviolet، يعني لما بدك تجيبي تعملي فحص السكر هنا
ما بتستخدمي الـ plastic cuvette العادية اللي
بنحطها في الجهاز، لأ، الـ cuvette بتكون زجاج، تمام؟ لأن
الـ 340 هذا wavelength موجود في منطقة فوق بنفسجية
في الـ UV، في الـ Ultraviolet، فبنقيس الـ NADH ونسبته
بتعبّر عن نسبة السكر، طبعاً هذه طريقة reference
method، هي الطريقة المرجعية على الرغم من أنها
الطريقة المرجعية، إلا أنه نادر استخدامها، كتير ما
بتشتغل بهذه الطريقة، لأنها طريقة، على الرغم من أنها
مرجعية، بدها متطلبات، بدها جهاز Spectrophotometer بيشتغل على
الكيوفيت تكون من الزجاج، مصنوعة من الزجاج، وغالية
كتير، اللمبة اللي بتطلع الشعاع تبع الـ wavelengths
اللي طوله 340 نانومتر، برضه هذه اللمبة اللي موجودة
في الـ Spectrophotometer برضه حاجتها غالية، يعني okay، طريقة
مرجعية لكن لا تستخدم، وبالنسبة للمعادلات يا جماعة
مش مطلوبة، بس بدنا نفهم المبدأ، تمام؟ الطريقة الثانية
فيه كتير أجهزة بتشتغل بهذه الطريقة، الـ Glucose
Dehydrogenase Method، يعني من اسم الطريقة بتفهم إن
الـ Reagent جواته إنزيم اسمه Glucose Dehydrogenase
يعني بتروحي، الجلوكوز اللي موجود في عينة الـ patient
في عينة المريض، في وجود الـ NAD ووجود إنزيم اللي
موجود في الـ Reagent، الـ Glucose Dehydrogenase
هيشتغل على السكر الموجود في عينة المريض ويعطيني مادة
Gluconolactone + NADH + H+، برضه
هنا بنقيس الـ NADH على 340، ومقداره يعبر عن مستوى
السكر في الدم، برضه هذه الطريقة كتير أجهزة ما بتشتغل
فيها، آخر طريقة، وهذه الطريقة الـ most common، الشائعة،
الـ popular، الأكثر انتشاراً، واللي شركتنا بتصنع الـ
reagent تبع السكر بهذه الطريقة، جلوكوز أوكسيديز
method، بدنا نفهم أن الـ reagent يحتوي على إنزيم
اسمه جلوكوز أوكسيديز، لما أضيف الـ reagent على عينة
الـ patient، هذا الإنزيم الـ oxidase هيعمل
oxidation، أكسدة للسكر اللي موجود في عينة المريض، وفي
الآخر يعطيني مركب، مادة ملونة، وإحنا بنقيس
اللون، وشدة اللون تعبر عن مستوى السكر، يعني لو
طلع اللون غامق كتير، نتيجة التفاعل، أنت حتجد أنك حطيت
الـ reagent على عينة المريض، لو ظهر لك مادة ملونة
ولونها غامق كتير، يعني بتحكي أكيد السكر يعني عالي
كتير، لو طلع اللون كويس طبيعي بتحكي أكيد السكر عند
هذا المريض طبيعي، إذن من شدة اللون أنا بشوف أو بقدر
أُقدر مستوى السكر، تمام؟ هذه الطريقة بيسموها طريقة
الـ Glucose Oxidase Method، تسمى باسم آخر، الـ
Trinder's Method، طريقة الـ Trinder's تعتمد على
إنزيم دايكروماتري، يعني الإنزيم بيتفاعل مع
السكر، بعطيني في الآخر دايكروماتري، لون دايكروماتري
ملون، بجي أقيس هذا اللون بجهاز الـ Spectrophotometer وبعطيني
Absorbance، وطريقة أخرى اسمها kinetic method، طريقة
حركية، هذه هنفهمها أكثر لما نأخذ شغل الإنزيمات
ونفحص الإنزيمات، تمام؟ بس المهم كتير أجهزة بتشتغل على
مبدأ الـ Trinder's method، enzyme dichlorometric، هل جيت
بدنا نعمل فحص السكر؟ إيش الـ Specimen Collection؟
إيش نوع العينة؟ العينة قد تكون Serum، البلازما is
suitable for samples، عادي، يا Serum يا بلازما
الـ whole blood، تجيبي لي دم كامل، تحكي لي اعملي عليه
فحص السكر، ما بينفعش، لازم أفصل هذا الدم وأطلع منه الـ
Serum والبلازما، والـ Serum والبلازما هما العينة،
تمام؟ أما whole blood مرفوض، والـ hemolysis يعني
لو جاءتك عينة hemolyzed برضه هذه rejected، مرفوضة،
are not recommended for use as a sample، يعني لا
يوصى باستخدامهم كعينة، تمام؟ الـ freshly drawn serum
is the preferred specimen، بيحكي لي أن أفضل عينة هي
الـ serum، تمام؟ لكن شو المسموح فيه؟ المسموح يا serum
يا بلازما، طيب، لو بلازما، إيش نوع الـ
anticoagulant اللي لازم أجمع فيه عينات الـ blood؟
بيقول لك يا إما EDTA يا هيبارين، مسموح فيهم، يا
EDTA يا هيبارين، طبعاً تجيك من الشركة الأنابيب
جاهزة، فيها EDTA، أنبوبة الـ EDTA أو أنبوبة
الـ هيبارين، كلكم عارفين، بيحكي لي يفضل أنا كأخصائي
التحاليل الطبية بعرف إن هذا الشخص بدي أعمل له فحص
سكر مثلاً، بجيب أنبوبة EDTA وبحط فوق الـ EDTA شغلة
اسمها glycolytic inhibitor، مثبتات لعملية الـ Glycolysis
وحنشوف ليش، تمام؟ ليش أنا بجيب الأنابيب
اللي فيها الـ EDTA أو الـ Heparin وبحط فيها
glycolytic inhibitor، مثبتات لعملية الـ Glycolysis، ليش
هذا العمل أنا بعمله، هنجيء في الـ slide الثانية،
هنشوف، بيقول لي إنه كيف ممكن أحفظ عينتي سواء Serum أو
Plasma، بتفصليهم، بتجيبي أنبوبة لحال، بتفصلي الـ Serum
لحال أو البلازما لحال، وبتخزني الـ Serum والبلازما
ممكن أخزنهم سبعة أيام يظلوا stable في الثلاجة من
2 إلى 8 درجات مئوية، أو ممكن أخليهم يومين
موجودين، متركين على الـ room temperature، على درجة
حرارة 20 إلى 25 درجة مئوية، برضه بيظل
الـ Serum والبلازما stable، تمام؟ هل جئت مثلاً، جاءني
مريض وبدي أعمل له فحص سكر مثلاً، بدي أجمع له Serum، بروح
أجيب أنابيب plane tube، ما فيها أي Anti-coagulant
اللي لون الغطاء تبعها أحمر، وقبل ما أحط الدم فيها
بروح أجيب مادة اسمها Sodium Fluoride، هذه المادة
تعتبر glycolytic inhibitor، هي مثبتة لعملية
الـ Glycolysis، بأخذ من هذه المادة 2 مليجرام، و
بحطها جوة الـ plane tube اللي بدي أجمع فيها الدم، و
بعدين بروح على المريض بسحب منه 1 مل دم، 1 مل blood، و
بحطها في هذه الأنبوبة، وبعمل mix منيح، وبروح بفصّلها
وبأطلّع الـ Serum منها، أو لو شخص بدي أجمع له بلازما
بروح أجيب أنابيب فيها Anticoagulant، إما EDTA
أو Heparin، وبرضه قبل ما أضيف الدم في هذه
الأنابيب، بروح أجيب 2 مليجرام من مادة الـ Sodium
Fluoride وبحطها في الأنابيب، وبعدين بروح أسحب blood
من المريض، 1 مل مثلاً، بنسحب منه وبنحطها، ونعمل mix
وبعدين بنروح نفصل البلازما، ليش أنا قبل ما أحط الدم
في الأنابيب، بروح أضيف مادة اسمها Sodium Fluoride،
هذه المادة تعتبر glycolytic inhibitor، مثبتة لعملية
الـ Glycolysis، The addition of 2 milligram من الـ
Sodium Fluoride لكل 1 مل blood to be collected
will prevent glycolysis، إضافة هذه المادة وبعد ذلك
بضيف الدم، وبعد ذلك بفصّل العينة، هذا يمنع عملية الـ
Glycolysis، العمليات الحيوية اللي بتقوم فيها خلايا
الدم الحمراء، هل جئت؟ طب ليش أنا بمنع عملية
الـ Glycolysis؟ هل جئت؟ بدي أطلب منكم شغلة، لما أنتم
تفصلوا عينة الدم، تمام؟ إيش بينزل تحت؟ بينزل تحت
الخلايا، الـ RBCs، الـ Platelets، الـ White Blood Cells، بينزل
الخلايا تحت، تمام؟ فوق إيش بيكون؟ فوق بيكون
الـ Serum أو البلازما، تمام؟ الـ Serum إيش فيه؟ فيه
المواد الكيميائية المهمة، الجلوكوز، فيه
البروتينات، فيه الإنزيمات، هل جئت؟ لو ظلّ الـ Serum
contact مع الخلايا، يعني أنت ما فصلت الـ Serum لحاله
في الـ tube لحالها، خليتيها العينة مفصولة، والـ RBCs
تحت، والـ Serum فوق، فوق بعض من غير فصل، إيش بدي
يصير؟ اللي بيصير إنه الخلايا الـ RBCs، خلايا حية
طول ما هي حية بدها تعمل Glycolysis، إيش يعني بدها
تعمل Glycolysis؟ يعني بدها تبدأ تسحب الجلوكوز من
الـ Serum، تبدأ، ما هي بدأت تتغذى برضه، خلايا، بدها تسحب
الجلوكوز من الـ Serum، تجيء أنت تأخذ الـ Serum، بدك
تفحص له السكر، بتلاقي السكر كتير واطي، بتلاقي مثلاً
30، 20، بتقولي طيب ليش هيك؟ هل المريض عن جد عنده
Hypoglycemia، انخفاض في مستوى السكر، حالة مرضية، ولا
المشكلة كانت إنك نسيت، الـ Serum فوق الـ RBCs، وصار في
احتكاك بين الـ Serum والـ RBCs، وبالتالي الخلايا عملت
Glycolysis، عملت Glycolysis، يعني سحبت الجلوكوز من
الـ Serum، عشان هيك بنقول لك أول ما تصلك العينة، على طول
لفّيها على الجهاز، وفصّلي الـ Serum في أنبوبة منفصلة
وكمان شغلة، عشان نمنع الـ Glycolysis تماماً، ضيفي الـ
Sodium Fluoride أثناء جمع العينة، ضيفي Sodium
Fluoride في أنبوبة الجمع، لأن هذه المادة تمنع خلايا
الـ RBCs تسحب السكر من الـ Serum، تمام؟ الـ
Glycolysis، يبقى مفتوحاً في غرفة حارة، ربما حوالي
10 مليجرام في ديسيلتر في ساعة، لو كانت خلايا الـ
RBCs contact مع الـ Serum، وتركتيها أنت في الأنبوبة في
درجة حرارة شوية مرتفعة، يعني warm room، درجات حرارة
حارة، وتركتيها لمدة ساعة، كل ساعة مستوى السكر بيقل
بنسبة 10 مليجرام per deciliter، كل ساعة السكر
بيقل 10 مليجرام per deciliter، طب لو تركتيها
ساعتين، مستوى السكر هيقل 20 مليجرام، لو تركتيها
الأنبوبة ثلاث ساعات، مستوى السكر هيقل 30 مليجرام
per deciliter، فهذا أمر خطير، The decrease in serum
glucose concentration is negligible، بيحكي لي يعني
الانخفاض في مستوى السكر يمكن تفاديه، تمام؟ أنا ممكن
أتفاذاه كيف؟ لو أنا جمعت الـ blood sample، if the
blood sample is kept cool، لو أنت جمعتي العينة في
درجات حرارة باردة، معظم المختبرات مكيفة، لأن معظم
الفحوصات بتحتاج درجات حرارة يعني لطيفة، مش تكون
حارة كتير أو باردة كتير، and the serum separated، و
تفصلي الـ serum بسرعة from the clot، تفصلي الـ serum عن
خلايا الـ RBCs خلال نصف ساعة من جمع العينة، يعني خلال
نصف ساعة من جمعتي العينة بسرعة بدك تلفّي العينة، تفصلي
الـ serum، وتشتغلي لها فحص السكر، عشان تتفادي نقصان
السكر نتيجة عملية الـ Glycolysis اللي بتصير،
الـ Glycolysis هو سحب خلايا الـ RBCs لمستوى السكر
اللي موجود في الـ serum، نتيجة احتكاكهم في بعض، There
ولو عُيدَ التجربة ثاني، برضه النتائج هتطلع مختلفة، فكلام
Technician أنت هتشوف فيه Variation، فيه اختلاف في
النتائج خلال اليوم، معنى الكلام إنه فيه problem
الإنسان الطبيعي ما بيكونش فيه اختلاف في نتائجه
مهما عُيدَ عليه الفحص، بس الإنسان اللي عنده مشاكل هيكون
فيه عنده variation في النتائج، وهذا الفحص اسمه
casual blood glucose، يا جماعة، هذا الـ Random عمله
عشان مثلًا أنا خلال اليوم كنت قاعدة وباكل وبشرب
فجأة أغمى عليّ مثلًا، أخدوني على المستشفى، طلب الدكتور
فحص السكر، أقول له لا والله هي ما كانتش صائمة طول اليوم
بتاكل، بتشرب، عشان هيك عملوا فحص اسمه Random Blood
Sugar، بأي وقت بسحب عينة دم، بعمل لك فحص السكر من غير
أي شروط، ومن غير ما يكون الصوم إشي أساسي، طبعًا الـ
Random Blood Sugar له Normal Range خاص فيه، والـ
Fasting Blood Sugar، والـ Two Hour Post Prandial Blood Sugar
بدنا نفهم إن كل فحص من هذه الفحوصات لها
Normal Range خاص فيها، اسم طريقتنا لـ Trenders
Method، هذا مبدأ شغل الـ Kit تبع السكر، الـ Reagent
تبع السكر الجلوكوز، أخدناه في الحيوية، نوع الجلوكوز
الموجود في السيرم تبع الإنسان من نوع Alpha-D
-Glucose، هذا الجلوكوز بيكون موجود في عينة بروح
أضيف عليه الـ Reagent تبع السكر، الـ Reagent بيحتوي
على إنزايم اسمه Mutarotase، إنزايم هذا الإنزيم
بيحول الـ Alpha-D جلوكوز للـ Beta-D جلوكوز، هالجلوكوز الـ
Beta-D جلوكوز في وجود الميّه، أيضًا الميّه هي من
ضمن مكونات الرياجنت، وفي وجود الـ Oxygen، الـ O2
اللي جاي من الهواء الجوي، وفي وجود إنزايم الجلوكوز
أكسيداز اللي بشكل أساسي موجود في الـ Reagent، هيحول
الـ Beta-D-Glucose إلى الـ D-Gluconic Acid و H2O2
هالجلوكوز الـ H2O2 في وجود مادة الـ 4-Aminophenazone
والفينول، برضه هذه كلها من ضمن مكونات الـ Reagent
وفي وجود إنزايم البروكسيداز برضه من مكونات
الـ Reagent، في الآخر هنحصل على مادة اسمها
Quinoneimine و 4 جزيئات ميّه، هذه المادة
Quinoneimine هذه هي الـ colored compound، هذا هو
المركب الملون الناتج من تفاعل الـ reaction تبع
السكر مع السيرم، ومع السكر الموجود في السيرم تبع
المريض، يعني حاصل تفاعل الـ Reagent مع السكر
الجلوكوز اللي موجود في السيرم تبع المريض، قلنا في
الآخر بيطلع عندي مركب له لون، The intensity of the
color formed، شدة اللون تبع هذا المركب اللي اتكون
is proportional to the glucose concentration in
the sample، بتتناسب تناسب طردي مع تركيز السكر في
العينة، يعني لو كان الشخص سكر 200 و 300، نتيجة
تفاعل السكر مع الـ Reagent هيظهر لون، الـ intensity
الشدة تبعته هيكون كتير غامق، تمام؟ وهذا اللون
بتنقياسه على جهاز الـ Spectrophotometer، على
wavelength من 500 لـ 550 نانومتر، أنت فيك تضبطيه
على أي wavelength بتراوح ما بين الـ 500 و 550
نانومتر، نيجي لها الـ procedure طبعًا إن شاء الله
هنشتغلها عمليًّا لما نرجع على الجامعة، الـ procedure
كالتالي: أول شيء بتروح تجيب rack وبتحط عليه أربع
plastic tubes، تمام؟ وبتعملي Labeling على الـ
plastic tubes، واحدة بتكتبي عليها Blank، واحدة بتكتبي
عليها Standard، واحدة بتكتبي عليها Control، والأنبوبة
الرابعة بتكتبي عليها الـ Patient Sample، عينة
المريض، تمام؟ الأربع أنابيب كلهم بنضيف على كل
أنبوبة 1 ML من Reagent A، اللي هو الـ Reagent الخاص
بالسكر، تمام؟ بتجيبي أربع قنابيب بتعملي لهم Labeling
تكتبي Blank، و Standard، و Control، و Sample، والأربع
قنابيب هدول كل أنبوبة بتحطي عليها 1 ML يعني ألف
مايكرو ليتر من الـ Reagent تبع السكر، تمام؟ بعدين
في كيت السكر جواها أنبوبة كتير صغيرة اسمها Standard
هذا الـ Standard عبارة عن محلول جواته سكر، عبارة عن
solution بيحتوي على السكر، تمام؟ إله تركيز معين
بيكون، بتروحي تجيبي هذه أنبوبة الـ Standard الصغيرة
الموجودة في الـ Kit، تاخدي منها عشرة مايكرو ليتر و
بتحطيها في الـ plastic tube تبعت الـ Standard و
بتعملي mix، إذًا الـ tube تبعت الـ Standard أصبح فيها
1 ML من الـ Reagent و عشرة مايكرو ليتر من الـ
Standard نفسه و بتعملي mix منيح، تمام؟ بعدين بتروحي
تجيبي أنبوبة الـ Control، هذا بيكون جاي من الشركة
powder وبنحله في ميّه، وبتروحي تاخدي من أنبوبة الـ
Control عشرة مايكرو ليتر، تمام؟ وبتحطيها في الأنبوبة
تبعت الـ Control، plastic tube تبعت الـ Control
هيك tube الـ Control بيكون فيها 1 ML Reagent و 10
مايكروليتر من الـ Control نفسه، تمام؟ بعدين بتروحي
تجيب الـ patient sample، عينة المريض، الـ serum تبعه
أو الـ plasma تبعته اللي بدك تفحصي لها السكر، تاخدي
منها عشرة microliter و بتحطيها في أنبوبة الـ
patient sample، أصبح فيها 1 ML Reagent و 10 µL من الـ
serum تبع الـ Patient، برضه بتروحي تجيبي 10 µL من الـ
distilled water من الميّ المعقّمة، و بتحطيها في
أنبوبة Blank، إذًا أنبوبة Blank فيها 1 ML Reagent
مع 10 µL distilled water، هيك الأربع أنابيب أنا حضرتهم
فيه بنات هيسألوني، الـ Control ليش أنا أمشيها؟ يعني
مش هيفيدني في الحسابات، وفي إني أطلع تركيز السكر
عند المريض، okay؟ صح كلامكم، بس إحنا اتفقنا، في
كل شغل، في كل فحص، لازم أمشي Control، سواء أمشي
الـ Normal والـ Abnormal Control، أو أمشي نوع
واحد، تمام؟ هي كل أنبوبة صار فيها 1 ML reagent
وفيها الـ 10 µL، اللي منها مثلًا الـ Blank، 1 ML
reagent و 10 µL ميّه، الـ Standard، 1 ML reagent
و 10 µL الـ Standard، الـ Control، 1 ML
reagent و 10 µL Control، الـ Sample، 1 ML
reagent و 10 µL Sample، تاخدي الأربع قنابيب
وبتحطيهم في الـ Water Bath على درجة حرارة 37 لمدة
10 دقائق، وبعد ما تخلص الـ 10 دقائق تاخدي هذه
الأنابيب، بتضبطي جهاز الـ Spectrophotometer العادي
طبعًا أنتم فحص السكر اشتغلتوه على فكرة في السوائل
وبتضبطي الجهاز على 505 نانومتر، كتب لك من 530 لـ 590
برضه صح، بتضبطيه على أي wavelength، تمام؟ وبعد هيك
بتحطي، بتجيبي أنبوبة الـ Blank بتحطيها في الـ cuvette
وبتصفري الجهاز عليها، بعد هيك بتحطي الـ Standard
وبتاخدي absorbance، وبتحطي الـ Control وبتاخدي الـ
Absorbance تبعته، وبتحطي الـ Sample و بتاخدي الـ
Absorbance تبعته، آخر جملة بيحكيلك الـ Color is
stable for 60 minutes، يعني الفحص بيضل stable 60
دقيقة، ساعة كاملة، يعني لو أنا طلعت الأنابيب من الـ
water bath وما كانش عندي وقت أروح أقرأهم على
الجهاز تبع الـ Spectro بسرعة، ممكن أتركهم لمدة
ساعة، الفحص بيضل تمام وبيطلع نتائجه، نيجي أنا
طلعت الـ Absorbance تبع الـ Sample من الجهاز، وطلعت
الـ Absorbance تبع الـ Standard من الجهاز، تمام؟
نيجي أنا إيش بدي أحسب؟ نشوف قانون بير لامبرت، الـ
Glucose Concentration، تركيز السكر تبع الـ patient
sample بالـ mg/dL، إيش بيساوي؟
بالطبق القانون، الـ Absorbance تبع الـ Sample على الـ
Absorbance تبع الـ Standard ضرب الـ Concentration للـ
Standard، الـ Absorbance للـ Sample أنا جيبته من
الجهاز، والـ Absorbance للـ Standard جيبته من الجهاز
الـ Standard Concentration، كنا اتفقنا إن أنبوبة
الـ Standard عبارة عن سكر، وهذا السكر له تركيز معين
كيف بدي أعرف تركيزه؟ على الأنبوبة نفسها بيكون
مكتوب تركيزه، وحطلعوا أنتم لحالكم الـ Standard
Concentration، أول ما تتطلعي عليه علبة الـ Standard،
هعطيك إياها، بيكون مكتوب عليها تركيز السكر اللي
موجود في هذا الـ Standard، وبالتالي الـ Standard
Concentration معلوم، من وين معلوم؟ على الأنبوبة
تبعت الـ Standard، إذًا الثلاث مجاهيل الموجودين،
بينطبق عليهم وبينطلع النتيجة تبعت السكر في الـ
Patient Sample، تمام؟ الوحدة اللي إحنا بنستخدمها هي
mg/dL، هذه الشائعة، لكن ممكن أطلع
مستوى السكر بوحدة، بوحدة أخرى اسمها الـ mmol
/L، نشوف كيف بدنا نعمل الـ conversion factor
التحويل، نيجي النتيجة اللي طلعت معك بالـ mg
/dL، النتيجة بتروحي تضربيها بهذا الرقم 0.05555
فتطلع النتيجة بالـ mmol/L، تمام؟
لكن لو أنا عندي مستوى السكر بوحدة الملي مول per لتر
وبدي أحوله لملي جرام per دي سي لتر، تضربي هاد
النتيجة تبع الملي مول per لتر، بتضربيها بـ 18
برضه لو عندي أنا مستوى السكر بالـ mg/dL
وبدي أطلعه بالـ mmol/L، ممكن أقسم
على 18، التحويلات لو حفظتي واحدة تحفظي الباقي،
سهلة كتير، تطبيق قانون Beer's Law برضه سهل
Absorbance الـ Sample والـ Standard معلوم، وتركيز
الـ Standard برضه معلوم، بيجي مع الشركة، من الشركة جاهز
وبالتالي بنقدر نحسب مستوى السكر للمريض في عينته، هنا
الـ Normal Range، الوضع الطبيعي، هذا حفظ لما نيجي
نتحدث عن الفحص الأول، أخدناه الـ fasting blood sugar
الإنسان الطبيعي من 70 لـ 110، هذا Normal Fasting
Glucose، طب لو إنسان ثاني طلع عنده من 110 لـ 126
mg/dL، هذا بحكي عنه Prediabetic
يعني مشكوك في أمره، يعني عنده risk factor واحتمال في
المستقبل، احتمال كبير يصير عنده سكر، طب لو شخص ثالث
عمل فحص وطلع سكره 126 فما فوق، معنى الكلام
هذا أكيد بيكون diabetic، تمام؟ أما الـ 2 Hour Post
Prandial Blood Sugar اللي بنعمله لمرضى السكري، الناس
اللي بياخدوا الإنسولين، عندهم بتكون normal وطبيعية
و كويسة، لازم يطلع سكرهم من 110 لـ 140 mg/dL
الـ Random blood sugar، يعني لو أنت أكلت
وشربت وتغديت وسُحبت منك عينة، يفترض سكرِك يطلع شكل
طبيعي، أقل من 140 mg/dL، إذًا هذا
الـ Normal Range للثلاث فحوصات، In diabetes mellitus
عند مرضى السكري، the level of fasting blood
glucose is 126 mg/dL، يعني لو شخص
عملت له fasting blood sugar، الفحص الأول، وطلع عنده 612 00: